Клеточные доказательства трансфекции ганглиозных клеток сетчатки после лечения LHON

Альфредо А. Садун, доктор медицинских наук, и его коллеги провели международное патологоанатомическое исследование человеческих глаз, обработанных генной терапией на основе аденоассоциированного вируса (AAV2) по поводу наследственной оптической невропатии Лебера (LHON). Результаты были представлены на ежегодном собрании Американской академии офтальмологии в Сан-Франциско.

По словам первого автора, доктора Садуна, итогом исследования стало то, что результаты предоставили первые молекулярные и клеточные доказательства успешной трансфекции генов ганглиозных клеток сетчатки у людей. Интересно, что этот эффект наблюдался в обоих глазах пациента, несмотря на то, что инъекция была односторонней. Доктор Садун из Института глаз Доэни, Медицинской школы Дэвида Геффена Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе.

Генная терапия AAV2 при LHON

LHON — это наследуемое по материнской линии слепое митохондриальное генетическое заболевание, вызванное мутацией m.11778G>A в НД4 ген. Исследователи объяснили, что лечение генной терапией на основе AAV2 компенсирует мутацию m.11778G>A в пораженных ганглиозных клетках сетчатки.

В обсуждаемое исследование были включены 2 пациента из клинического исследования RESCUE. Пациентам в течение 6 месяцев после двусторонней потери зрения проводилась интравитреальная инъекция ленадогена нолпарвовека (AAV2-НД4) при 9×1010 vg в одном глазу и ложной инъекции в парный глаз [Table].

Исследователи провели посмертный гистопатологический и молекулярный анализ глаз с использованием специальной иммуногистохимии, лазерной микродиссекции сетчатки и капельной цифровой полимеразной цепной реакции.

Пациенты исследования

Пациент 1 был 29-летним мужчиной; пациент 2 — мужчина 22 лет. У обоих был LHON, вызванный m.11778G>A. НД4 мутация. Пациент 1 умер от острой алкогольной интоксикации. Пациент 2 умер от остановки сердца.

У пациента 1 AAV2-НД4 трансген был распределен в обоих глазах, но преимущественно в правой сетчатке. В неинъецированном глазу обнаружено минимальное количество трансгена (1:200). Клинически через 1 и 2 месяца после лечения в правом глазу отмечалось умеренное внутриглазное воспаление передней камеры и стекловидного тела; через 6 месяцев и 1 год внутриглазного воспаления не наблюдалось. В передней камере содержалось несколько старых пигментированных преципитатов кератита и пигментированных клеток. Через 6 месяцев в правом глазу появилась периодическая пульсация, которая исчезала со сном; в 1 год оба глаза постоянно горели и были светочувствительны.

Гистопатологически очаговые участки воспаления были обнаружены в височной части сетчатки, предположительно вблизи места инъекции, и, что особенно важно, в виде обширной ангиоцентрической хронической лимфоцитарной инфильтрации в головке зрительного нерва. Это коррелировало с клинической внутриглазной инфильтрацией.

Исследователи объяснили, что трансген во внутренней половине сетчатки был примерно в 100 раз более сконцентрирован, чем во внешней сетчатке, и был наиболее распространен в височной части сетчатки возле макулы. Трансген не обнаружен в пигментном эпителии сетчатки, сосудистой оболочке и зрительном нерве.

Напротив, у пациента 2 очагов воспаления в сетчатке или диске зрительного нерва обоих глаз не наблюдалось. Через 2 месяца и 1 год после инъекции в левом глазу возникло легкое промежуточное внутриглазное воспаление (без сопутствующего лечения).

Комментируя полученные результаты, авторы заявили: «Эффективность количества ДНК у пациента 2 была намного выше, чем у пациента 1. Как и у пациента 1, AAV2-НД4 трансген был обнаружен в сетчатке обоих глаз».

Ключевые моменты, полученные от двух пациентов, заключаются в следующем:

У пациента 1 наблюдалась лимфоцитарная инфильтрация в височной части сетчатки и особенно вокруг сосудов диска зрительного нерва. [Figures 1A, 1B and 1C]. ААВ2-НД4 Трансфекция сетчатки была очевидна в инъецированном глазу и обнаруживалась на гораздо более низком уровне в контралатеральном глазу.

У пациента 2, напротив, не было гистопатологических признаков стойкого воспаления. Однако, как и у пациента 1, AAV2-НД4 трансген был обнаружен в сетчатке обоих глаз и примерно в одинаковом соотношении: 200 (инъецированный глаз) к 1 (партнерский глаз). [Figure 2].

«В целом, — заявили исследователи, — это исследование представляет собой первое свидетельство успешной трансфекции генов ганглиозных клеток сетчатки. Интересно, что это произошло в обоих глазах после односторонней инъекции, и дальнейшие эксперименты на перекресте зрительных нервов и других частях мозга пациента 2 продолжаются, чтобы определить путь переноса».

Ссылка

1. Альфредо А. Садун, Нэнси Дж. Ньюман и др. Гистопатологические и молекулярные характеристики в посмертных анализах глаз после генной терапии AAV2 при LHON. Плакат представлен на собрании Американской академии офтальмологии; 3–6 ноября 2023 г.; Сан-Франциско, Калифорния.

Альфредо А. Садун, доктор медицинских наук | электронная почта: [email protected]

Альфредо А. Садун, доктор медицинских наук, занимает должность председателя Фонда Флоры Л. Торнтон, является руководителем Глазного центра Доэни в Калифорнийском университете в Лос-Анджелесе и заместителем председателя отделения офтальмологии в Калифорнийском университете в Лос-Анджелесе. Он является лауреатом премии AAO Life Achievement Award и премии ARVO Gold Fellow Award.