Исследуемая популяция
Настоящее исследование было проведено в рамках исследования CORDIOPREV, которое означает исследование CORonary Diet Intervention with Olive Oil and сердечно-сосудистую профилактику (Clinicaltrials.gov, номер NCT00924937). Исследование было проведено в университетской больнице королевы Софии в Кордове, Испания. Дизайн исследования включал рандомизированное, слепое и контролируемое диетическое вмешательство в одном центре. Всего было включено 1002 пациента с ИБС, и недавно была опубликована подробная информация относительно обоснования, методов исследования, критериев включения и исключения, сердечно-сосудистых факторов риска и исходных характеристик пациентов. [13]. Короче говоря, подходящие пациенты включали мужчин и женщин в возрасте от 20 до 75 лет, у которых был установлен ИБС, у которых не было клинических коронарных событий в предыдущие шесть месяцев, которые могли соблюдать долгосрочное диетическое вмешательство и не имели тяжелых заболеваний. заболевания или ожидаемая продолжительность жизни ниже продолжительности исследования. Верхний возрастной предел был установлен на основе ожидаемой продолжительности жизни на момент начала исследования (2007 г.) и соответствовал обычной практике современных долгосрочных сердечно-сосудистых исследований.
Информированное письменное согласие было получено от всех участников до их включения в исследование. Протокол исследования получил одобрение Комитета по изучению человеческих расследований Университетской больницы королевы Софии в соответствии с институциональными рекомендациями и рекомендациями надлежащей клинической практики.
Основная цель исследования CORDIOPREV — оценить эффективность средиземноморской диеты по сравнению с диетой с низким содержанием жиров для предотвращения клинических осложнений и смертности у пациентов с предшествующей ИБС посредством долгосрочного последующего исследования. Здесь мы сообщаем о результатах одного вторичного результата исследования CORDIOPREV: заболеваемости СД2. В эту работу мы включили 462 из 1002 пациентов, у которых на момент начала исследования не был диагностирован СД2. Из этих пациентов, не страдающих СД2, на исходном уровне у 107 пациентов развился СД2 (Инцидент-СД2) в соответствии с диагностическими критериями Американской диабетической ассоциации (ADA). [14]после медианного периода наблюдения 60 месяцев. Из этого исследования были исключены 19 пациентов, поскольку у нас не было их данных TL; таким образом, окончательная выборка состояла из 338 пациентов без СД2 и 105 пациентов с СД2 (дополнительный рисунок 1). Ежегодно заболеваемость СД2 оценивалась в соответствии с критериями СД2 ADA: уровень глюкозы в плазме натощак ≥ 126 мг/дл или уровень глюкозы в плазме через 2 часа при пероральном глюкозотолерантном тесте с дозой 75 г ≥ 200 мг/дл или уровень гликозилированного гемоглобина (HbA1c) ≥ 6,5%. . При отсутствии явной гипергликемии для диагностики необходимы два аномальных результата теста из одного и того же образца или из двух отдельных тестовых образцов. [14].
Размер выборки и расчет мощности этого подисследования были рассчитаны на основе следующих предположений: уровень заболеваемости СД2 в группе средиземноморской диеты составил 10%, 17% в группе с низким содержанием жиров и статистическая мощность 80%. , где α двух хвостов = 0,05. С учетом этих допущений и предположения о 10% предполагаемых потерь необходимый размер выборки был установлен из 163 пациентов в каждой из групп диетического вмешательства. В настоящую работу были включены все субъекты, у которых исходно не был клинически диагностирован СД2 (n = 462; 216 человек, придерживавшихся диеты с низким содержанием жиров и 246 человек, придерживавшихся средиземноморской диеты). В эту группу были включены все 107 субъектов, у которых развился СД2 (42 человека придерживались диеты с низким содержанием жиров и 65 человек придерживались средиземноморской диеты). У остальных 355 пациентов не был диагностирован СД2 (174 человека придерживались диеты с низким содержанием жиров и 181 человек придерживались средиземноморской диеты) (дополнительный рисунок 1).
Рандомизация и маскирование
Рандомизация была проведена Андалузской школой общественного здравоохранения (соотношение 1:1). Диетологи были единственными членами интервенционной группы, которые знали о диетической группе каждого участника. Вкратце, рандомизация основывалась на следующих переменных: пол (мужской, женский), возраст (<60 и ≥ 60 лет) и перенесенный инфаркт миокарда в анамнезе (да, нет). Подробности о рандомизации были сообщены и обобщены ранее. [15].
Диетическое вмешательство
Пациенты были рандомизированы для получения одной из двух различных моделей здорового питания: (1) средиземноморская диета с минимум 35% калорий из жиров (22% мононенасыщенных, 6% полиненасыщенных и <10% насыщенных жирных кислот), 15% белков и максимум 50% углеводов и (2) диета с низким содержанием жиров, рекомендованная Национальной образовательной программой по холестерину, с <30% общего количества жиров (12–14% мононенасыщенных, 6–8% полиненасыщенных и <10% насыщенных жирных кислот). ), 15% белков и минимум 55% углеводов. В обеих диетах содержание холестерина было доведено до <300 мг/день. Настоящее исследование проводилось в течение пятилетнего периода наблюдения. Подробности о диетах были сообщены и обобщены ранее. [15].
Пациенты проходили индивидуальное собеседование с диетологом на исходном уровне и ежегодно для заполнения полуколичественного опросника по частоте приема пищи из 137 пунктов, ранее утвержденного в Испании. [16]. Ежегодно проводится скрининг приверженности средиземноморской диете из 14 пунктов. [17] использовался для измерения соблюдения средиземноморской диеты, а диетический скрининг из 9 пунктов использовался для оценки соблюдения диеты с низким содержанием жиров. Кроме того, обе группы вмешательства получили одинаковые интенсивные диетические консультации. Персонализированные индивидуальные интервью, проводимые диетологом на исходном уровне и каждые шесть месяцев. Кроме того, ежеквартально проводились коллективные образовательные занятия с участием до 20 участников на сеанс и отдельные занятия для каждой группы.
Лабораторные измерения
После 12-часового ночного голодания в начале исследования и один раз в год в течение периода наблюдения у участников брали образцы венозной крови в пробирки с ЭДТА (конечная концентрация 0,1% ЭДТА) и плазму отделяли от красной крови. клетки центрифугировали при 1500×g в течение 15 мин при 4°С и сразу же замораживали при -80°С. Биохимические измерения проводились в Университетской больнице королевы Софии персоналом, который не знал о вмешательствах. Липидные показатели оценивали с помощью модульного анализатора DDPPII Hitachi (Roche, Базель, Швейцария) с использованием специальных реагентов (Boehringer-Mannheim, Мангейм, Германия). Концентрации триглицеридов и холестерина в плазме определяли ферментативными методами. Уровень холестерина липопротеинов высокой плотности (HDL-c) измеряли после осаждения аликвоты плазмы декстрансульфатом-Mg2+. Концентрацию липопротеинов-холестерина низкой плотности (ЛПНП-х) рассчитывали по уравнению Фридевальда по следующей формуле: ЛПНП-х = общий холестерин – (ЛПВП-х + триглицериды/5). Измерения глюкозы проводили гексокиназным методом. Высокочувствительный С-реактивный белок (вч-СРБ) определяли методом ELISA (BioCheck, Inc., Фостер-Сити, Калифорния, США).
Выделение ДНК из образцов крови
ДНК выделяли из фракции лейкоцитной пленки методом высаливания. [18]используя 10 мл буфера Монреаль-Балтимор (0,32 М сахароза, 0,1 мМ Трис-HCl, pH 7,5, 0,025 мМ MgCl2, 1% Тритон Х-100), перемешивая и центрифугируя для отделения ядерной фракции. Нуклеиновый осадок гомогенизировали с 3 мл буфера для лизиса ядер (10 мМ Трис-HCl, pH 8,2, 2 мМ ЭДТА, 0,4 М NaCl) и 10% SDS и протеиназы К. ДНК осаждали 6 М NaCl и промывали 100 % спирт этиловый. Наконец, геномную ДНК экстрагировали и ресуспендировали в 500 мкл 1 × буфера TE. Чистоту и концентрацию ДНК оценивали спектрофотометрически с использованием NanoDrop ND-2000 (ThermoFisher, Уолтем, Массачусетс).
Количественный ПЦР-анализ TL
TL определяли методом Коутона методом qPCR. [19]. Для всех образцов мы оценили относительное соотношение числа копий теломерных повторов (T), нормализованное по отношению к одному гену-копии, гену RPL13a рибосомального белка L13a человека разумного (S). Результаты каждой ПЦР приводили к стандартной кривой, построенной с использованием эталонного образца ДНК. Стандартные кривые для ПЦР теломер и гена RPL13a состояли из восьми эталонных стандартов ДНК (1–25 нг). Все ПЦР проводили с использованием термоциклера iQ5-BIORAD и набора SensiFAST SYBR Lo-ROX (Bioline). Коэффициент вариации (%CV) составил 9,32% для числа копий теломерных повторов и 6,76% для количества копий единичного гена. Профиль термоциклера для обоих ампликонов начинался с инкубации при 95 °C в течение 3 минут для активации полимеразы, за которой следовали 40 циклов при 95 °C в течение 5 с, 54 °C в течение 15 с. Состав реакционной смеси был идентичным, за исключением олигонуклеотидных праймеров: матричная ДНК 20 нг, 1 × SensiFAST SYBR Lo-ROX, обратный праймер 200 нМ и прямой праймер 200 нМ. Конечный объем каждой реакции ПЦР составлял 20 мкл. Последовательности праймеров были (5’→ 3’):
TeloFw, CGGTTTGTTTGGGTTTGGGTTT GGGTTTGGGTTTGGGTT; TeloRw, GGCTTGCCTTACCC TTACCCTTACCCTTACCCTTACCCT; RPL13aFw, CCTGGAGGAGAAGAGGAAAGAGA; RPL13aRw, TTGAGGACCTCTGTGTATTTGTCAA.
Экстракцию ДНК и измерения TL проводили исходно и через 4 года. Хотя оценка TL в дополнительные моменты времени может дать дополнительную ценную информацию, мы не наблюдали статистически значимых изменений TL через 4 года в рамках нашего исследования. В этой работе мы оцениваем роль TL на исходном уровне как маркера для выявления лиц с риском короткого TL (TL <20-й процентиль).
Статистический анализ
Статистический анализ проводился с помощью STATA 14 (STATA Corp., Техас, США). Мы использовали среднее значение и стандартную ошибку среднего значения (среднее ± SEM) для непрерывных переменных и проценты для категориальных переменных. Все значения p были двусторонними, а значение ap <0,05 считалось статистически значимым.
Определение кратчайшего TL, а не среднего TL, связано с дисфункцией теломер и ограничением клеточной выживаемости. [20, 21]. Таким образом, пациенты были классифицированы в соответствии с риском короткого TL на исходном уровне, определяемым как TL ниже 20-го процентиля и отсутствием риска как TL выше 20-го процентиля, как сообщалось ранее. [22,23,24].
Для сравнения между группами использовалась непарная пара Стьюдента. Категориальные переменные сравнивались с использованием критериев хи-квадрат. Мы использовали точный тест Фишера, чтобы оценить взаимосвязь между заболеваемостью СД2 у участников и риском короткого TL. Чтобы показать взаимосвязь между заболеваемостью СД2 и риском короткого TL, были применены мозаичные графики, на которых высота столбцов представляет долю участников с высоким или низким риском коротких теломер, а ширина каждого столбца пропорциональна заболеваемости СД2. Модель логистической регрессии была использована для оценки риска возникновения СД2 в зависимости от риска коротких теломер. Мы использовали регрессию пропорциональных рисков Кокса, чтобы проверить потенциальную прогностическую ценность TL и потенциальную роль TL для выбора модели питания для снижения риска развития диабета. Кроме того, мы провели статистический анализ для оценки взаимодействия по группам диеты и риска короткого TL в регрессионной модели Кокса. Регрессионный анализ был скорректирован с учетом возраста, пола, индекса массы тела (ИМТ), окружности талии (ОТ), HbA1c, HDL-c, триглицеридов и семейного анамнеза как диабета, так и ранней ишемической болезни сердца. В качестве дополнительного анализа был проведен анализ рабочей характеристической кривой приемника (ROC) для оценки возможности TL для классификации популяции пациентов с СД2 и пациентов без СД2. Мы выполнили две модели: первая на основе клинических переменных (ИМТ, возраст, пол, использование триглицеридов и статинов), вторая модель с добавлением TL.
2024-03-16 18:31:46
1710616419
#Длина #теломер #как #биомаркер #диетотерапии #для #профилактики #развития #сахарного #диабета #типа #пациентов #ишемической #болезнью #сердца #рандомизированное #контролируемое #исследование #CORDIOPREV #Сердечнососудистая #диабетология
