Срезы тканей под контролем света для объемной визуализации

Очистка тканей и расширенная микроскопия являются ценными инструментами для изучения неповрежденных тканей головного мозга, но масштабирование этих методов на более крупные образцы требует механического разделения срезов, что часто приводит к искажению образцов. Запись в НаукаВан и др. решить эту проблему, представив рабочий процесс визуализации, который позволяет получать объемные флуоресцентные изображения с наномасштабным разрешением. Метод, называемый VIPS, — для объемной визуализации с помощью фотохимического разреза — включает в себя образцы в гидрогель, который содержит фоторасщепляемый сшивающий агент. Затем используется ультрафиолетовый свет или многофотонное возбуждение для расщепления точного слоя гидрогеля, который разрушает слой ткани между каждым циклом визуализации.

Авторы используют VIPS для картирования аксонов и миелиновых оболочек в ~2-кратно расширенной обонятельной луковице (ОБ) одной мыши дикого типа и одной нейродегенеративной мыши, лишенной НПЦ1 ген. У человека мутации в НПЦ1 вызывают болезнь Нимана-Пика типа C1, смертельное заболевание, которое приводит к ранней дисмиелинизации. Авторы показывают, что НПЦ1-нулевой OB имеет меньшую плотность аксонов и миелиновой оболочки по сравнению с OB дикого типа. Как внутри, так и между уровнями акушерства VIPS фиксировал вариабельность тяжести дегенерации и выживания аксонов. В НПЦ1 OB дегенерация началась во внешних слоях и распространилась внутрь.